ⅠNкислотаи ucleiciмуқаддима
Кислотаи нуклеинӣ ба кислотаи дезоксирибонуклеинӣ (ДНК) ва кислотаи рибонуклеинӣ (РНК) тақсим мешавад, ки дар байни онҳо РНК аз рӯи вазифаҳои гуногуни худ ба РНК рибосомӣ (rRNA), паёмнависӣ РНК (mRNA) ва интиқоли РНК (tRNA) тақсим мешавад.ДНК асосан дар ядро, митохондрия ва хлороформ мутамарказ шудааст, дар ҳоле ки РНК асосан дар ситоплазма паҳн шудааст.Ҳамчун асоси моддии ифодаи генҳо, истихроҷи кислотаи нуклеинӣ дар таҳқиқоти биологияи молекулавӣ ва ташхиси клиникии молекулавӣ нақши бениҳоят муҳим мебозад.Консентратсия ва тозагии истихроҷи кислотаи нуклеинӣ бевосита ба ПТР, пайдарпаӣ, сохтмони вектор, ҳазми ферментҳо ва дигар таҷрибаҳо таъсир мерасонад.
Ⅱ Усули истихроҷ ва тозакунии кислотаи нуклеинӣ
① Усули истихроҷи фенол/хлороформ
Истихроҷи фенол/хлороформ як усули классикии истихроҷи ДНК мебошад, ки барои коркарди намунаҳо асосан ду ҳалкунандаҳои гуногуни органикиро истифода бурда, кислотаи нуклеин дар асоси ДНК-ро дар фазаи об, липидҳоро дар марҳилаи органикӣ ва сафедаҳо байни ду фаза ҳал мекунад.Ин усул бартариҳои арзон, тозагии баланд ва таъсири хуб дорад.Камбудихо кори мураккаб ва мухлати дароз мебошанд.
② Усули Тризол
Усули Trizol як усули классикии истихроҷи РНК мебошад.Усули Тризол пас аз центрифуга бо хлороформ ба фазаи обӣ ва фазаи органикӣ тақсим мешавад, ки дар он РНК дар фазаи обӣ ҳал мешавад, фазаи обӣ ба найчаи нави EP интиқол дода мешавад, пас аз илова кардани изопропанол боришот ба даст меояд ва сипас тозакунии этанол.Ин усул барои истихроҷи РНК аз бофтаҳои ҳайвонот, ҳуҷайраҳо ва бактерияҳо мувофиқ аст.
③ Усули тозакунии сутуни марказӣ
Усули тозакунии сутуни центрифуга метавонад ДНК-ро махсус тавассути маводи махсуси адсорбсияи кремнийи матритсаи кремний адсорб кунад, дар ҳоле ки РНК ва сафеда метавонанд ба осонӣ гузаранд ва сипас барои муттаҳид кардани кислотаи нуклеинӣ, намаки пасти PH-и баланд барои ҷудо кардан ва тоза кардани кислотаи нуклеинӣ истифода баранд.Афзалиятҳо консентратсияи баланди тозакунӣ, устувории баланд, ниёз ба ҳалкунандаҳои органикӣ ва арзиши паст мебошанд.Камбудӣ дар он аст, ки он бояд зина ба зина центрифуга карда шавад, қадамҳои бештари амалиёт.
④ Усули маҳтобҳои магнитӣ
Усули маҳтобҳои магнитӣ аз тақсим кардани намунаи бофтаи ҳуҷайра тавассути лизат иборат аст, ки кислотаи нуклеинро дар намуна озод кунад ва сипас молекулаҳои кислотаи нуклеинӣ дар сатҳи маҳтоби магнитӣ ба таври махсус адсорб карда мешаванд, дар ҳоле ки ифлосиҳо ба монанди сафедаҳо ва қандҳо дар онҳо боқӣ мемонанд. моеъ.Тавассути марҳилаҳои тақсимоти бофтаи ҳуҷайра, пайвастшавии магнитӣ бо кислотаи нуклеинӣ, шустани кислотаи нуклеинӣ, элюсияи кислотаи нуклеинӣ ва ғайра, ниҳоят кислотаи нуклеинӣ тоза ба даст оварда мешавад.Афзалиятҳо кори оддӣ ва истифодаи кӯтоҳмуддат, бе зарурати центрифугаи қадамӣ мебошанд.Он дорои талаботи техникӣ паст аст ва метавонад амалиёти автоматӣ ва оммавӣ амалӣ.Маҷмӯи мушаххаси маҳтоби магнитӣ ва кислотаи нуклеинӣ кислотаи нуклеини истихроҷшударо бо консентратсияи баланд ва покӣ месозад.Камбудиаш он аст, ки нархи имрузаи бозор нисбатан гарон аст.
⑤ Усулҳои дигар
Илова ба чор усули дар боло зикршуда, крекинги ҷӯшон, усули намаки консентратӣ, усули шустушӯи анионӣ, усули ултрасадо ва усули ферментативӣ ва ғайра мавҷуданд.
Ⅲ Навъи истихроҷи кислотаи нуклеинӣ
Foregene дорои платформаи пешрафтаи мустақими PCR дар ҷаҳон, платформаи изолятсияи ду-сутуни РНК (танҳо барои ДНК + танҳо RNA ).Маҳсулоти асосӣ маҷмӯаҳои изолятсияи ДНК/РНК, силсилаи реагентҳои молекулавии лабораторияи реагентҳои PCR ва мустақими PCR мебошанд.
① Истихроҷи умумии РНК
Намунаҳои умумии истихроҷи РНК хун, ҳуҷайраҳо, бофтаҳои ҳайвонот, растаниҳо, вирусҳо ва ғайраҳоро дар бар мегиранд. Покии баланд ва консентратсияи баланди РНК-ро тавассути истихроҷи умумии РНК ба даст овардан мумкин аст, ки онро дар RT-PCR, таҳлили чип, тарҷумаи in vitro истифода бурдан мумкин аст, клонкунии молекулй, Дот Блот ва дигар тачрибахо.
Алоқамандии хориҷӣМаҷмӯаҳои изолятсияи RNA
Маҷмӯаи изолятсияи умумии RNA Animal--Аз бофтаҳои гуногуни ҳайвонот РНК-и умумии тоза ва хушсифатро зуд ва самаранок истихроҷ кунед.
Маҷмӯаи изолятсияи умумии RNA ҳуҷайра--Дар давоми 11 дақиқа аз ҳуҷайраҳои гуногуни парваришшуда РНК-и хеле тозашуда ва баландсифатро гирифтан мумкин аст.
Маҷмӯаи изолятсияи умумии RNA растаниҳо--Аз намунаҳои растанӣ бо миқдори ками полисахарид ва полифенол РНК-и баландсифатро зуд истихроҷ кунед.
Маҷмӯаи изолятсияи вирусии РНК--РНК-и вирусиро аз намунаҳо ба монанди плазма, хуноба, моеъҳои бадан аз ҳуҷайра ва супернатантҳои фарҳанги ҳуҷайра зуд ҷудо кунед ва тоза кунед.
② истихроҷи ДНК-и геномӣ
Намунаҳои истихроҷи ДНК-и геномӣ хок, наҷосат, хун, ҳуҷайраҳо, бофтаҳои ҳайвонот, растаниҳо, вирусҳо ва ғайраро дар бар мегиранд. Истихроҷи геномии ДНК метавонад дар ҳозимаи ферментҳо, сохтмони китобхонаи ДНК, PCR, омодасозии антитело, таҳлили гибридизатсияи ғарбӣ, чипи ген, баланд -пайдабандии интиқол ва дигар таҷрибаҳо.
Алоқамандии хориҷӣМаҷмӯаҳои изолятсияи ДНК
Маҷмӯаи ҷудокунии ДНК бофтаҳои ҳайвонот--Босуръат истихроҷ ва тоза кардани ДНК-и геномӣ аз сарчашмаҳои гуногун, аз қабили бофтаҳои ҳайвонот, ҳуҷайраҳо ва ғайра.
Маҷмӯаи ДНК-и хун (1-5 мл)--ДНК-и геномии баландсифатро аз хуни антикоагулятсияшуда зуд тоза кунед (1-5 мл).
Buccal Swab / FTA Корти ДНК маҷмӯаи изолятсия--ДНК-и геномии баландсифатро аз тампонҳои бука/намунаҳои корти FTA зуд тоза кунед.
Маҷмӯаи изолятсияи ДНК-и растанӣ--ДНК-и геномии баландсифатро аз намунаҳои растанӣ зуд тоза кунед ва ба даст оред (аз ҷумла полисахаридҳо ва намунаҳои растаниҳои полифенол)
③ истихроҷи плазмид
Плазмид як намуди ДНК-и хурди даврашакл дар ҳуҷайраҳост, ки интиқолдиҳандаи маъмул барои рекомбинатсияи ДНК мебошад.Усули истихроҷи плазмид аз хориҷ кардани РНК, ҷудо кардани плазмид аз ДНК-и геномии бактериявӣ ва хориҷ кардани сафеда ва дигар ифлосиҳо барои ба даст овардани плазми нисбатан пок мебошад.
Маҷмӯаи Mini General Plasmid--ДНК-и баландсифати плазмидиро аз бактерияҳои табдилёфта зуд тоза кунед, то таҷрибаҳои муқаррарии биологияи молекулавӣ ба монанди трансформатсия ва ҳозимаи ферментҳо
④ Дигар намудҳои истихроҷ, истихроҷи miRNA ва ғайра.
Маҷмӯаи изолятсияи miRNA ҳайвонот--Фрагментҳои хурди РНК-и 20-200 nt miRNA, siRNA, snRNA-ро аз бофтаҳо ва ҳуҷайраҳои гуногуни ҳайвонот зуд ва самаранок истихроҷ кунед
Ⅳ Талабот барои истихроҷи кислотаи нуклеинӣ ва натиҷаи тозакунӣs
① Таъмини якпорчагии сохтори ибтидоии кислотаи нуклеинӣ.
② Кам кардани дахолати сафедаҳо, қандҳо, липидҳо ва дигар макромолекулаҳо
③ Ҳеҷ гуна ҳалкунандаи органикӣ ё консентратсияи баланди ионҳои металлӣ вуҷуд надошта бошад, ки метавонанд ферментро дар намунаҳои кислотаи нуклеинӣ боздоранд.
④ РНК ва дигар ифлосшавии кислотаи нуклеинӣ ҳангоми истихроҷи ДНК бояд бартараф карда шаванд ва баръакс.
Вақти фиристодан: Ноябр-24-2022
